Javascript is op it stuit útskeakele yn jo blêder.As javascript is útskeakele, sille guon funksjes fan dizze webside net wurkje.
Javier Fidalgo, * Pierre-Antoine Deglesne, * Rodrigo Arroyo, * Lilian Sepúlveda, * Evgeniya Ranneva, Philippe Deprez Department of Science, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Kataloanië, Spanje * Dizze auteurs hawwe wat ynsjoch yn dit wurk Equal bydrage eftergrûn: Hyaluronic acid (HA) is in natuerlik foarkommende polysaccharide brûkt by de produksje fan dermal fillers foar estetyske doelen.Om't it in heale libben fan ferskate dagen hat yn minsklike weefsels, wurde HA-basearre dermale fillers chemysk oanpast om har libben yn it lichem te ferlingjen.De meast foarkommende wiziging yn kommersjele HA-basearre fillers is it gebrûk fan 1,4-butanediol diglycidyl ether (BDDE) as in crosslinking agent foar crosslink de HA keatlingen.Residuele of net-reagearre BDDE wurdt beskôge as net-toxik by <2 dielen per miljoen (ppm);dêrom, de oerbleaune BDDE yn de finale dermal filler moat wurde kwantifisearre te garandearjen pasjint feilichheid.Materialen en metoaden: Dizze stúdzje beskriuwt de deteksje en karakterisearring fan in byprodukt fan 'e cross-linking-reaksje tusken BDDE en HA ûnder alkaline omstannichheden troch kombinearjen fan floeistofchromatografy en massaspektrometry (LC-MS).Resultaten: Nei ferskate analyzes waard fûn dat de alkaline betingsten en hege temperatueren dy't brûkt wurde om de HA-BDDE hydrogel te desinfektearjen de formaasje fan dit nije byprodukt, de "propylene glycol-like" ferbining befoardere.LC-MS-analyze befêstige dat it byprodukt deselde monoisotopyske massa hat as BDDE, in oare retinsjetiid (tR), en in oare UV-absorbânsje (λ = 200 nm) modus.Oars as BDDE, waard yn LC-MS-analyze waarnommen dat ûnder deselde mjitbetingsten dit byprodukt in hegere deteksjefrekwinsje hat by 200 nm.Konklúzje: Dizze resultaten jouwe oan dat d'r gjin epoxide is yn 'e struktuer fan dizze nije ferbining.De diskusje is iepen om it risiko te beoardieljen fan dit nije byprodukt fûn yn 'e produksje fan HA-BDDE hydrogel (HA dermal filler) foar kommersjele doelen.Keywords: hyaluronic acid, HA dermal filler, cross-linked hyaluronic acid, BDDE, LC-MS analyze, BDDE byprodukt.
Fillers basearre op hyaluronic acid (HA) binne de meast foarkommende en populêre dermale fillers dy't brûkt wurde foar kosmetyske doelen.1 Dizze dermale filler is in hydrogel, meastentiids gearstald út> 95% wetter en 0,5-3% HA, wat har in gel-achtige struktuer jout.2 HA is in polysaccharide en de wichtichste komponint fan 'e ekstrazellulêre matrix fan vertebraten.Ien fan de yngrediïnten.It bestiet út (1,4)-glucuronic acid-β (1,3)-N-acetylglucosamine (GlcNAc) werheljende disaccharide ienheden ferbûn troch glycosidic obligaasjes.Dit disaccharide patroan is itselde yn alle organismen.Yn ferliking mei guon proteïne-basearre fillers (lykas kollagen), makket dit eigendom HA in heul biokompatibel molekule.Dizze fillers kinne spesifisiteit fan aminosûrsekwinsje fertoane dy't kin wurde erkend troch it ymmúnsysteem fan 'e pasjint.
As brûkt as dermal filler, is de wichtichste beheining fan HA syn rappe omset yn 'e weefsels fanwegen de oanwêzigens fan in spesifike famylje fan enzymen neamd hyaluronidases.Oant no binne ferskate gemyske modifikaasjes yn 'e HA-struktuer beskreaun om it heale libben fan HA yn weefsels te fergrutsjen.3 De measte fan dizze oanpassings besykje de tagong fan hyaluronidase nei polysaccharide-polymeren te ferminderjen troch HA-keatlingen te ferwikseljen.Dêrom, troch de formaasje fan brêgen en de intermolekulêre kovalente bannen tusken de HA-struktuer en de cross-linking-agent, produsearret de cross-linked HA-hydrogel mear anty-enzyme-degradaasjeprodukten dan de natuerlike HA.4-6
Oant no binne de gemyske crosslinkende aginten dy't brûkt wurde foar it produsearjen fan crosslinked HA omfetsje methacrylamide, 7 hydrazide, 8 carbodiimide, 9 divinyl sulfone, 1,4-butanediol diglycidyl ether (BDDE) En poly(ethylene glycol) diglycidyl ether.10,11 BDDE is op it stuit it meast brûkte crosslinking-agent.Hoewol't dizze soarten hydrogels binne bewiisd feilich te wêzen foar tsientallen jierren, de crosslinking aginten brûkt binne reaktive reagents dy't kin wêze cytotoxic en, yn guon gefallen, mutagenic.12 Dêrom moat har oerbliuwende ynhâld yn 'e definitive hydrogel heech wêze.BDDE wurdt as feilich beskôge as de oerbliuwende konsintraasje minder is dan 2 dielen per miljoen (ppm).4
D'r binne ferskate metoaden om BDDE-konsintraasje mei leechresidu, cross-linking-graad en substitúsjeposysje yn HA-hydrogels te detektearjen, lykas gaschromatografy, grutte-útslutingchromatografy keppele mei massaspektrometrie (MS), nukleêre magnetyske resonânsje (NMR) fluoreszinsjemetoades, en Diode-array-keppele hege prestaasjes floeistofchromatografy (HPLC).13-17 Dizze stúdzje beskriuwt de deteksje en karakterisearring fan in byprodukt yn 'e definitive cross-linked HA hydrogel produsearre troch de reaksje fan BDDE en HA ûnder alkaline omstannichheden.HPLC en floeistofchromatografy-massaspektrometrie (LC-MS analyze).Sûnt de toxicity fan dit byprodukt fan BDDE is ûnbekend, wy riede oan dat syn residu kwantifikaasje moat wurde bepaald op in fergelykbere wize oan de metoade meastentiids útfierd op BDDE yn it definitive produkt.
It verkregen natrium sâlt fan HA (Shiseido Co., Ltd., Tokio, Japan) hat in molekulêre gewicht fan ~1.368.000 Da (Laurent metoade) 18 en in yntinsive viskositeit fan 2.20 m3 / kg.Foar de crosslinking-reaksje waard BDDE (≥95%) kocht fan Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA).Fosfaatbufferde saline mei pH 7.4 waard kocht fan Sigma-Aldrich Company.Alle solvents, acetonitril en wetter brûkt yn 'e LC-MS-analyse waarden kocht fan HPLC-kwaliteit.Mienzuur (98%) wurdt kocht as reagensklasse.
Alle eksperiminten waarden útfierd op in UPLC Acquity systeem (Waters, Milford, MA, Feriene Steaten) en ferbûn oan in API 3000 triple quadrupole massa spektrometer útrist mei in electrospray ionisaasje boarne (AB SCIEX, Framingham, MA, Feriene Steaten).
De synteze fan cross-keppele HA-hydrogels waard begon troch it tafoegjen fan 198 mg BDDE oan in 10% (w/w) oplossing fan natriumhyaluronate (NaHA) yn 'e oanwêzigens fan 1% alkali (natriumhydroxide, NaOH).De definitive BDDE-konsintraasje yn it reaksjegemik wie 9,9 mg/mL (0,049 mM).Dan, it reaksje mingsel waard yngeand mingd en homogenized en tastien te gean by 45 ° C foar 4 oeren.19 De pH fan 'e reaksje wurdt hâlden op ~12.
Dêrnei waard it reaksjegemik wosken mei wetter, en de definitive HA-BDDE-hydrogel waard filtrearre en verdund mei PBS-buffer om in HA-konsintraasje fan 10 oant 25 mg / ml te berikken, en in definitive pH fan 7.4.Om de produsearre cross-keppele HA hydrogels te sterilisearjen, wurde al dizze hydrogels autoklaveare (120 ° C foar 20 minuten).De suvere BDDE-HA hydrogel wurdt opslein by 4 ° C oant analyze.
Om de BDDE oanwêzich yn it cross-keppele HA-produkt te analysearjen, waard in 240 mg-monster weage en ynfierd yn it sintrum gat (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, USA; folume 0.5 mL) en sintrifuge by 10.000 rpm by keamertemperatuer 10 minuten.In totaal fan 20 µL fan pull-down floeistof waard sammele en analysearre.
Om de BDDE-standert (Sigma-Aldrich Co) te analysearjen ûnder alkaline omstannichheden (1%, 0.1% en 0.01% NaOH), as de folgjende betingsten foldien wurde, is it floeibere monster 1:10, 1:100, of oant 1: 1.000.000 As it nedich is, brûk MilliQ deionisearre wetter foar analyse.
Foar de útgongsmaterialen dy't brûkt wurde yn 'e cross-linking-reaksje (HA 2%, H2O, 1% NaOH, en 0.049 mM BDDE), waard 1 mL fan elke sample taret út dizze materialen analysearre mei deselde analysebetingsten.
Om de spesifisiteit fan 'e peaks te bepalen dy't ferskine yn' e ionkaart, waard 10 µL fan 100 ppb BDDE-standertoplossing (Sigma-Aldrich Co) tafoege oan it 20 µL-monster.Yn dit gefal is de definitive konsintraasje fan 'e standert yn elke stekproef 37 ppb.
Tariede earst in BDDE-stock-oplossing mei in konsintraasje fan 11.000 mg / L (11.000 ppm) troch 10 μL standert BDDE (Sigma-Aldrich Co) te ferwiderjen mei 990 μL MilliQ wetter (tichtens 1.1 g / mL).Brûk dizze oplossing om in 110 µg / L (110 ppb) BDDE-oplossing te meitsjen as in tuskenlizzende standertverdunning.Brûk dan it tuskenlizzende BDDE-standertverdunningsmiddel (110 ppb) om de standertkromme te meitsjen troch de tuskenlizzende diluent ferskate kearen te ferwetterjen om de winske konsintraasje fan 75, 50, 25, 10 en 1 ppb te berikken.Lykas werjûn yn figuer 1, wurdt fûn dat de BDDE standert kromme fan 1.1 oan 110 ppb hat goede lineariteit (R2> 0.99).De standert kromme waard werhelle yn fjouwer ûnôfhinklike eksperiminten.
Figure 1 BDDE standert kalibraasje kromme krigen troch LC-MS analyze, dêr't in goede korrelaasje wurdt waarnommen (R2> 0,99).
Ofkoartings: BDDE, 1,4-butaandiol diglycidyl ether;LC-MS, floeistofchromatografy en massaspektrometrie.
Om de BDDE-standerts oanwêzich yn 'e cross-linked HA en de BDDE-standerts yn' e basisoplossing te identifisearjen en te kwantifisearjen, waard LC-MS-analyse brûkt.
De chromatografyske skieding waard berikt op in LUNA 2.5 µm C18 (2) -HST kolom (50 × 2.0 mm2; Phenomenex, Torrance, CA, USA) en hâlden by keamertemperatuer (25 ° C) tidens de analyze.De mobile faze bestiet út acetonitril (oplosmiddel A) en wetter (oplosmiddel B) mei 0,1% mieresûr.De mobile faze wurdt eluearre troch gradienteluaasje.De gradient is as folget: 0 minuten, 2% A;1 minút, 2% A;6 minuten, 98% A;7 minuten, 98% A;7,1 minuten, 2% A;10 minuten, 2% A. De rinnende tiid is 10 minuten en it ynjeksjevolume is 20 µL.De retinsjetiid fan BDDE is sawat 3.48 minuten (fariearjend fan 3.43 oant 4.14 minuten basearre op eksperiminten).De mobile faze waard pompt mei in streamsnelheid fan 0,25 mL / min foar LC-MS-analyse.
Foar BDDE-analyze en kwantifikaasje troch MS wurdt it UPLC-systeem (Waters) kombinearre mei in API 3000 triple quadrupole massaspektrometer (AB SCIEX) útrist mei in electrospray ionisaasje boarne, en de analyze wurdt útfierd yn positive ion modus (ESI +).
Neffens de analyse fan ionfragminten útfierd op BDDE, waard it fragmint mei de heechste yntinsiteit bepaald as it fragmint dat oerienkomt mei 129.1 Da (figuer 6).Dêrom, yn 'e multi-ion-monitoringmodus (MIM) foar kwantifikaasje, is de massakonverzje (massa-to-ladingsferhâlding [m/z]) fan BDDE 203.3 / 129.1 Da.It brûkt ek folsleine scan (FS) modus en produkt ion scan (PIS) modus foar LC-MS analyze.
Om de spesifisiteit fan 'e metoade te ferifiearjen, waard in lege stekproef (earste mobile faze) analysearre.Gjin sinjaal waard ûntdutsen yn de lege stekproef mei in massa konverzje fan 203.3 / 129.1 Da.Oangeande de werhelling fan it eksperimint waarden 10 standert ynjeksjes fan 55 ppb (yn 'e midden fan' e kalibraasjekromme) analysearre, wat resultearre yn in residuele standertdeviaasje (RSD) <5% (gegevens net werjûn).
De oerbleaune BDDE-ynhâld waard kwantifisearre yn acht ferskillende autoklave BDDE cross-keppele HA-hydrogels, oerienkommende mei fjouwer ûnôfhinklike eksperiminten.Lykas beskreaun yn 'e seksje "Materialen en metoaden", wurdt de kwantifikaasje evaluearre troch de gemiddelde wearde fan 'e regressionkurve fan' e BDDE-standertverdunning, dy't oerienkomt mei de unike peak ûntdutsen by de BDDE-massatransysje fan 203.3 / 129.1 Da, mei in retinsje. tiid fan 3,43 oan 4,14 minuten Net wachtsjen.Figuer 2 toant in foarbyldchromatogram fan de 10 ppb BDDE referinsje standert.Tabel 1 vat de oerbliuwende BDDE-ynhâld fan acht ferskillende hydrogels gear.It weardeberik is 1 oant 2,46 ppb.Dêrom is de oerbliuwende BDDE-konsintraasje yn 'e stekproef akseptabel foar minsklik gebrûk (<2 ppm).
Figure 2 Ion chromatogram fan 10 ppb BDDE referinsje standert (Sigma-Aldrich Co), MS (m / z) oergong krigen troch LC-MS analyze fan 203.30 / 129.10 Da (yn positive MRM modus).
Ofkoartings: BDDE, 1,4-butaandiol diglycidyl ether;LC-MS, floeistofchromatografy en massaspektrometrie;MRM, meardere reaksjemonitoring;MS, massa;m/z, massa-to-lading ratio.
Opmerking: Samples 1-8 binne autoklave BDDE cross-keppele HA hydrogels.De oerbleaune hoemannichte BDDE yn 'e hydrogel en de peak fan BDDE retinsjetiid wurde ek rapportearre.Uteinlik wurdt ek rapportearre oer it bestean fan nije toppen mei ferskillende retensjonstiden.
Ofkoartings: BDDE, 1,4-butaandiol diglycidyl ether;HA, hyaluronsäure;MRM, meardere reaksjemonitoring;tR, retinsje tiid;LC-MS, floeistofchromatografy en massaspektrometrie;RRT, relative retensjonstiid.
Ferrassend, de analyze fan it LC-MS ion chromatogram liet sjen dat basearre op alle autoklave cross-keppele HA hydrogel samples analysearre, der wie in ekstra peak by de koartere retensjon tiid fan 2.73 nei 3.29 minuten.Bygelyks, figuer 3 toant it ion chromatogram fan in cross-keppele HA sample, dêr't in ekstra peak ferskynt op in oare retensjon tiid fan likernôch 2.71 minuten.De waarnommen relative retinsjetiid (RRT) tusken de nij waarnommen peak en de peak fan BDDE waard fûn om 0.79 te wêzen (tabel 1).Om't wy witte dat de nij waarnommen peak minder bewarre wurdt yn 'e C18-kolom dy't brûkt wurdt yn' e LC-MS-analyse, kin de nije peak oerienkomme mei in mear polêre ferbining as BDDE.
Figuer 3 Ion chromatogram fan cross-keppele HA hydrogel sample krigen troch LC-MS (MRM massa konverzje 203.3 / 129.0 Da).
Ofkoartings: HA, hyaluronsäure;LC-MS, floeistofchromatografy en massaspektrometrie;MRM, meardere reaksjemonitoring;RRT, relative retinsjetiid;tR, retinsjetiid.
Om de mooglikheid út te sluten dat de nije waarnommen piken fersmoarging binne dy't oarspronklik oanwêzich binne yn 'e brûkte grûnstoffen, waarden dizze grûnstoffen ek analysearre mei deselde LC-MS-analyzemetoade.De analysearre útgongsmaterialen omfetsje wetter, 2% NaHA yn wetter, 1% NaOH yn wetter, en BDDE by deselde konsintraasje brûkt yn 'e cross-linking-reaksje.It ion-chromatogram fan it brûkte útgongsmateriaal liet gjin ferbining of pyk sjen, en de retinsjetiid komt oerien mei de nije waarnommen pyk.Dit feit fersmyt it idee dat net allinich it útgongsmateriaal ferbiningen of stoffen kin befetsje dy't de analyseproseduere kinne bemuoie, mar d'r is gjin teken fan mooglike krúskontaminaasje mei oare laboratoariumprodukten.De konsintraasjewearden krigen nei LC-MS-analyse fan BDDE en nije peaks wurde werjûn yn tabel 2 (samples 1-4) en it ionchromatogram yn figuer 4.
Opmerking: Samples 1-4 oerienkomme mei de grûnstoffen dy't brûkt wurde foar it produsearjen fan autoklave BDDE cross-keppele HA hydrogels.Dizze samples waarden net autoklaveare.
Ofkoartings: BDDE, 1,4-butaandiol diglycidyl ether;HA, hyaluronsäure;LC-MS, floeistofchromatografy en massaspektrometrie;MRM, meardere reaksjemonitoring.
Figuer 4 komt oerien mei it LC-MS-chromatogram fan in stekproef fan it grûnstof dat brûkt wurdt yn 'e cross-linking-reaksje fan HA en BDDE.
Opmerking: Al dizze wurde mjitten by deselde konsintraasje en ferhâlding brûkt om de cross-linking-reaksje út te fieren.De nûmers foar de grûnstoffen analysearre troch it chromatogram oerienkomme mei: (1) wetter, (2) 2% HA wetterige oplossing, (3) 1% NaOH waterige oplossing.LC-MS-analyze wurdt útfierd foar massakonverzje fan 203.30/129.10 Da (yn positive MRM-modus).
Ofkoartings: BDDE, 1,4-butaandiol diglycidyl ether;HA, hyaluronsäure;LC-MS, floeistofchromatografy en massaspektrometrie;MRM, meardere reaksjemonitoring.
De betingsten dy't liede ta de foarming fan nije toppen waarden studearre.Om te studearjen hoe't de reaksjebetingsten dy't brûkt wurde om de cross-keppele HA-hydrogel te produsearjen de reaktiviteit fan 'e BDDE-cross-linking-agent beynfloedzje, dy't liede ta de foarming fan nije peaks (mooglike byprodukten), waarden ferskate mjittingen útfierd.Yn dizze bepalingen hawwe wy de definitive BDDE-crosslinker studearre en analysearre, dy't behannele waard mei ferskate konsintraasjes fan NaOH (0%, 1%, 0.1%, en 0.01%) yn in wetterich medium, folge troch of sûnder autoklave.De baktearjeproseduere om deselde betingsten te simulearjen is itselde as de metoade dy't brûkt wurdt om de cross-keppele HA-hydrogel te produsearjen.Lykas beskreaun yn 'e seksje "Materialen en metoaden", waard de massa-oergong fan it probleem analysearre troch LC-MS nei 203.30 / 129.10 Da.De BDDE en de konsintraasje fan de nije peak wurde berekkene, en de resultaten wurde werjûn yn Tabel 3. Gjin nije peaks waarden ûntdutsen yn 'e samples dy't net autoklave wiene, nettsjinsteande de oanwêzigens fan NaOH yn' e oplossing (samples 1-4, Tabel 3).Foar autoklave-samples wurde nije peaks allinich ûntdutsen yn 'e oanwêzigens fan NaOH yn' e oplossing, en de formaasje fan 'e peak liket ôfhinklik fan' e NaOH-konsintraasje yn 'e oplossing (samples 5-8, Tabel 3) (RRT = 0,79).Figuer 5 lit in foarbyld sjen fan in ionchromatogram, mei twa autoklave-monsters yn 'e oanwêzigens of ôfwêzigens fan NAOH.
Ofkoartings: BDDE, 1,4-butaandiol diglycidyl ether;LC-MS, floeistofchromatografy en massaspektrometrie;MRM, meardere reaksjemonitoring.
Taljochting: It boppeste chromatogram: It probleem waard behannele mei 0,1% NaOH waterige oplossing en autoklave (120 ° C foar 20 minuten).Bottom chromatogram: It stekproef waard net behannele mei NaOH, mar autoklave ûnder deselde betingsten.De massakonverzje fan 203.30 / 129.10 Da (yn positive MRM-modus) waard analysearre troch LC-MS.
Ofkoartings: BDDE, 1,4-butaandiol diglycidyl ether;LC-MS, floeistofchromatografy en massaspektrometrie;MRM, meardere reaksjemonitoring.
Yn alle autoklave-samples, mei of sûnder NaOH, waard de BDDE-konsintraasje sterk fermindere (oant 16,6 kear) (samples 5-8, Tabel 2).De fermindering fan BDDE-konsintraasje kin wêze troch it feit dat by hege temperatueren wetter kin fungearje as in basis (nukleofyl) om de epoxidring fan BDDE te iepenjen om in 1,2-diol-ferbining te foarmjen.De monoisotopyske kwaliteit fan dizze ferbining is oars as dy fan BDDE en sil dêrom net beynfloede wurde.LC-MS ûntdekte in massaferskowing fan 203.30/129.10 Da.
Uteinlik litte dizze eksperiminten sjen dat de generaasje fan nije peaks hinget fan 'e oanwêzigens fan BDDE, NAOH en it autoklaveproses, mar hat neat te meitsjen mei HA.
De nije peak fûn op in retensjetiid fan likernôch 2.71 minuten waard doe karakterisearre troch LC-MS.Foar dit doel waard BDDE (9,9 mg / ml) ynkubeare yn in 1% NaOH waterige oplossing en autoklave.Yn Tabel 4 wurde de skaaimerken fan 'e nije peak fergelike mei de bekende BDDE-referinsjepiek (retensjetiid sawat 3.47 minuten).Op grûn fan de ionfragmentaasje-analyze fan de twa peaks kin konkludearre wurde dat de peak mei in retinsjetiid fan 2,72 minuten deselde fragminten sjen lit as de BDDE-peak, mar mei ferskillende yntensiteiten (figuer 6).Foar de peak dy't oerienkomt mei de retinsjetiid (PIS) fan 2.72 minuten, waard in mear yntinsive peak waarnommen nei fragmintaasje by in massa fan 147 Da.By de BDDE-konsintraasje (9.9 mg / mL) brûkt yn dizze bepaling, waarden ferskate absorbânsjemodi (UV, λ = 200 nm) yn it ultravioletspektrum ek waarnommen nei chromatografyske skieding (figuer 7).De peak mei in retensjetiid fan 2,71 minuten is noch sichtber by 200 nm, wylst de BDDE-peak net ûnder deselde betingsten yn it chromatogram waarnommen wurde kin.
Tabel 4 Karakterisaasjeresultaten fan de nije pyk mei in retentiid fan sa'n 2,71 minuten en de BDDE-pyk mei in retensjetiid fan 3,47 minuten
Opmerking: Om dizze resultaten te krijen, waarden LC-MS- en HPLC-analyzes (MRM en PIS) útfierd op 'e twa peaks.Foar HPLC-analyse wurdt UV-deteksje mei in golflingte fan 200 nm brûkt.
Ofkoartings: BDDE, 1,4-butaandiol diglycidyl ether;HPLC, hege prestaasjes floeistofchromatografy;LC-MS, floeistofchromatografy en massaspektrometrie;MRM, meardere reaksjemonitoring;m/z, massa-to-lading ratio;PIS, produkt Ion skennen;ultraviolet ljocht, ultraviolet ljocht.
Opmerking: De massafragminten wurde krigen troch LC-MS-analyse (PIS).Top chromatogram: massa spektrum fan BDDE standert sample fragminten.Bottom chromatogram: It massaspektrum fan 'e nije peak ûntdutsen (RRT assosjearre mei de BDDE-peak is 0.79).BDDE waard ferwurke yn 1% NaOH oplossing en autoklave.
Ofkoartings: BDDE, 1,4-butaandiol diglycidyl ether;LC-MS, floeistofchromatografy en massaspektrometrie;MRM, meardere reaksjemonitoring;PIS, produkt ion scan;RRT, relative retensjonstiid.
Figuer 7 Ion-chromatogram fan it 203.30 Da-foargonger-ion, en (A) de nije peak mei in retensjetiid fan 2.71 minuten en (B) de UV-deteksje fan 'e BDDE-referinsje standert peak op 3.46 minuten by 200 nm.
Yn alle produsearre cross-linked HA hydrogels, waard beoardiele dat de oerbleaune BDDE konsintraasje nei LC-MS kwantifikaasje wie <2 ppm, mar in nije ûnbekende peak ferskynde yn 'e analyze.Dizze nije peak komt net oerien mei it BDDE-standertprodukt.It BDDE-standertprodukt hat ek deselde kwaliteitskonverzje ûndergien (MRM-konverzje 203.30 / 129.10 Da) analyze yn 'e positive MRM-modus.Yn 't algemien wurde oare analytyske metoaden lykas chromatografy brûkt as limyttests om BDDE yn hydrogels te detektearjen, mar de maksimale deteksjelimyt (LOD) is wat leger dan 2 ppm.Oan 'e oare kant binne oant no ta NMR en MS brûkt om de mjitte fan cross-linking en / of modifikaasje fan HA te karakterisearjen yn' e sûker-ienheidfragminten fan cross-linked HA-produkten.It doel fan dizze techniken hat nea west om residuele BDDE-deteksje te kwantifisearjen by sokke lege konsintraasjes as wy yn dit artikel beskriuwe (LOD fan ús LC-MS-metoade = 10 ppb).
Post tiid: Sep-01-2021